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分子诊断除了对pcr酶的活性和buffer有一定的要求,更是对包被pcr酶的抗体纯度有相当高的要求,普通的protein A/G纯化有大量的杂蛋白,这些杂蛋白对pcr或荧光定量pcr有严重的抑制作用,会出现杂带和引物二聚体,这些因素会直接导致实验失败。
目前市场上运用pcr酶抗体的公司有东洋纺和宝生物等,但是不同的公司pcr酶基因序列是有差异的,也就是这些日本公司的pcr酶抗体是专门为自己公司的酶特定的,可以充分和自己的pcr酶结合,抑制外切酶活性。很多分子公司就来张冠李戴,用日本公司的抗体和自己的pcr酶配套,结果效果不尽如意。
其二,亲和纯化对于分子技术人员也很清楚,因为抗原和抗体结合非常牢固,一般洗脱ph控制在2.5-3之间来洗脱,这样抗体很容易失活或损伤,受到损伤pcr酶抗体就不能完全同pcr酶结合,亦不能完全抑制pcr酶的外切酶活性,这样的分子实验就可想而知他的效果。
索莱尔推出的全新制备pcr酶抗体和纯化工艺,通过等电点来纯化,这样可以让抗体不受到任何损伤,让pcr反应可以顺利进行。 |
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